1          目的

建立無菌室浮遊菌測試標準操作程序，規範無菌室浮遊菌的檢測。

2          範圍

適用於無菌室（包括潔淨工作台）浮遊菌的測試和環境驗證。

3          職責

QA、QC人員遵照執行。

4          內容

4.1    參考標準：GB/T 16293-2010

4.2    測試方法

本測試方法為計數濃度法，即通過收集懸浮在空氣中的生物性粒子於專門的培養基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養基），經若幹時間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計數，以判定該無菌室的微生物濃度。

4.3    測試儀器、輔助設備和培養基

浮遊菌采樣器、培養皿（選用與儀器相適應的培養皿）、培養基、恒溫培養箱、高壓蒸汽滅菌器。

4.4    測試狀態及測試時間

4.4.1   靜態和k8凯发天生赢家一触即发人生兩種狀態均可進行測試，靜態測試時，室內測試人員不得多於2人。

4.4.2   在靜態a測試時，單向流無菌室（區），測試在淨化空調係統正常運行時間不少於10分鍾後開始；非單向流無菌室（區），測試在淨化空調係統正常運行不少於30分鍾後開始。在靜態b測試時，單向流無菌室（區），測試在生產操作人員撤離現場並經過10分鍾自淨後開始；非單向流無菌室（區），測試在生產操作人員撤離現場並經過20分鍾自淨後開始。

4.5    采樣點的確定

4.5.1   最少采樣點數目見表1，每次最小采樣量見表2。

表1 最少采樣點數目

表2 最小采樣量

4.5.2   采樣點位置布置宜力求均勻，避免采樣點在局部區域過於稀疏，采樣點按照《潔淨區環境監控管理規程》附件×××車間潔淨度監測采樣點布局圖的要求布置，每個采樣點一般采樣一次。

4.5.3   工作區采樣點位置離地0.8m~1.5m左右（略高於工作麵），送風口測點位置離開送風麵30cm左右，可在關鍵設備或關鍵工作活動範圍處增加測點。

4.6    測試準備

4.6.1   采樣器在進入被測區域前先清潔表麵，然後用75%酒精消毒一遍或存放於被測區域內，與被測試區域一起消毒（用於A級無菌室的采樣器必須預先放在被測房間內）。

4.6.2   A/B級區采用一次性培養皿，其它區域按無菌操作要求，在中檢室潔淨工作台上提前製備培養備用（將滅菌後的培養基用水浴溶解，冷卻至約50-60℃，Φ90mm培養皿每個傾注約20ml培養基，Φ150mm培每個傾注約30ml培養基），培養皿加蓋後在室溫下放至凝固。自製好的培養皿在無菌室內存放不超過48小時，2~8℃保存的培養皿一般不超過1周，一次性培養皿在標注的有效期內使用，過期不得使用。

4.6.3   A/B級區使用的培養皿在區域消毒前一次性傳入，隨環境一起消毒，在消毒液取用間架子上暫存，在有效期內使用。若需臨時傳入，則必須在前一天臭氧消毒前通過C級與B級傳遞窗傳入B級區進行臭氧消毒，第二天使用。傳入前表麵也必須用75%酒精擦拭。其它區域用培養皿按物品傳入要求當天傳入使用。

4.6.4   采樣前，先用75%酒精清洗采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外麵（FKC型浮遊空氣塵菌采樣器用酒精清洗采樣頭）。

4.6.5   測試具體操作見“JYQ-Ⅱ型浮遊菌采樣器標準操作程序或FKC-1型浮遊空氣塵菌采樣器標準操作程序”。

4.6.6   采樣結束後，蓋上培養皿蓋子，在培養皿上標注所有信息（包括產品批號，放置位置等），將培養皿用適宜的方式捆紮，倒置於30~35℃恒溫培養箱中培養，培養時間不少於2天。

4.6.7   培養結束後逐個檢查培養皿，用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數、標記，然後用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。

4.7    測試記錄應包含以下內容

4.7.1  被測試區域名稱、測試日期、測試依據、測試者姓名、測試儀器及測試方法的描述，測試時所采用的狀態和室內測試人員數，采樣點數目，測試次數、采樣流量，測試結果（包括所有統計計算資料）等。

4.7.2  若為k8凯发天生赢家一触即发人生測試，還應記錄現場操作人員數量，現場設備運轉情況等。

4.8    結果計算

4.8.1   用計數方法得出各個培養皿的菌落數。

4.8.2   每個測點的浮遊菌平均濃度計算按下式進行

4.9    結果評定

4.9.1   每個測點的浮遊菌平均濃度必須低於所選定評定標準中的界限。

4.9.2   在靜態測試時，若某測點的浮遊菌平均菌濃度超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為符合。

4.9.3   若有超過規定者，必須及時與生產部門聯係，對該區域進行消毒或其它處理，然後重新測試至合格。

4.10 日常監控

4.10.1  浮遊菌日常監控設糾偏限度和警戒限度（限度範圍及取樣頻次見《潔淨區環境監控管理規程》），以保證無菌室（區）的微生物濃度受到控製，定期檢測以檢查微生物負荷以及消毒劑的效力，並作傾向分析。靜態和k8凯发天生赢家一触即发人生的監控都可以采用該方法。

4.10.2  對於浮遊菌的取樣頻次，如果出現下列情況應考慮修改，在評估以下情況後，也應確定其他項目的檢測頻次

——連續超過糾偏限度和警戒限度；

——停工時間比預計延長；

——關鍵區域內發現有汙染存在；

——在生產期間，空氣淨化係統進行任何重大的維修；

——日常操作記錄反映出傾向性的數據；

——消毒規程的改變；

——引起生物汙染的事故等；

——當生產設備有重大維修或增加設備時；

——當無菌室（區）結構或區域分布有重大變動時。

4.11 注意事項

4.11.1     JYQ-Ⅱ型浮遊菌采樣器經消毒後先不放入培養皿，開啟浮遊菌采樣器，使儀器中的殘餘消毒劑蒸發，時間不少於5分鍾，檢查流量並根據采樣量調整設定采樣時間。

4.11.2     單向流無菌室（區）或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向，非單向流無菌室（區），采樣口向上。

4.11.3     測試時必須穿著與被測區域潔淨度級別要求相適應並經高壓滅菌後的無菌服。

4.11.4     布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。

4.11.5     采樣結束，需用75%酒精噴射采樣器罩子的內壁和轉盤（FKC型浮遊空氣塵菌采樣器噴射采樣頭和保護蓋）。

4.11.6     應采取一切措施防止采樣過程的汙染和其他可能對樣本的汙染。

4.11.7     每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否汙染，可每批選定3隻培養皿作為對照培養；培養皿在用於檢測時，為避免培養皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每次或每個區域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然後與采樣後的培養皿一起放入培養箱中培養，結果應無菌落生長。

4.11.8     采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或汙染的應剔除。

4.11.9     由於細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光於於培養皿背麵或正麵仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，並須注意細菌菌落或培養基沉澱物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。

4.11.10  必須定期對恒溫培養箱進行校驗。

5          相關文件

6          附件

無

7          變更曆史