淨化車間沉降菌測試操作規程

1  目的

建立一個淨化車間潔淨區（室）沉降菌檢測的標準操作程序，保證潔淨區微生物檢測按規範執行。

2  範圍

公司所有潔淨區（室）的沉降菌測定和環境的驗證。

3  責任者

質量技術部對本SOP實施負責。

4  程序

4.1  本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子於培養基平皿，經若幹時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔淨環境內的活微生物數，並以此來評定潔淨區（室）的潔淨度。

4.2  所用的儀器和設備

4.2.1  高壓蒸汽滅菌器

使用時應嚴格按照“高壓蒸汽滅菌器操作規程”和說明書操作。

4.2.2  恒溫培養箱

必須定期對培養箱的溫度計進行檢定。

4.2.3  培養皿

采用Φ90mm×15mm的硼矽酸玻璃培養皿。

4.2.4  培養基

4.2.4.1  普通肉湯瓊脂培養基或其他藥典認可的培養基。

4.2.4.2  培養基的準備及滅菌

4.2.4.2.1  將Φ90mm的培養皿置於121℃濕熱滅菌20min或180℃幹熱滅菌2h。

4.2.4.2.2 將培養基加熱溶化，冷至45℃時，在無菌操作要求下將培養基注入培養皿，每皿約15ml。

4.2.4.2.3  等瓊脂凝固後，將培養基平皿倒置於30℃-35℃恒溫培養箱中培養

48h，若培養基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用。製備好的培養基平皿宜在2℃-8℃的環境中存放。

4.3  測試步驟

4.3.1  采樣方法

將已製備好的培養皿按5.4.1.2的要求放置，打開培養皿蓋，使培養基表麵暴露0.5h，再將培養皿蓋蓋上後倒置。

4.3.2  培養

4.3.2.1  全部采樣結束後，將培養皿倒置於恒溫培養箱中培養。

4.3.2.2  在36℃±1培養箱中培養，時間不少於48h。

4.3.2.3  每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否汙染。可每批選定3隻培養皿作對照培養。

4.3.3  菌落計數

4.3.3.1  用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然後用5-10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.3.3.2  若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。

5 注意事項

5.1  測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

5.2  采取一切措施防止人為對樣本的汙染。

5.3  對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

5.4  由於細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光於培養皿背麵或正麵仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，並須注意細菌菌落與培養基沉澱物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。

5.5  采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或汙染的應剔除。

6  測試規則

6.1  測試狀態

6.1.1  沉降菌測試前，被測試潔淨區（室）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控製在規定值內。

6.1.2  沉降菌測試前，被測試潔淨區（室）已經過消毒。

6.1.3  測試狀態有靜態和k8凯发天生赢家一触即发人生兩種，測試狀態的選擇必須符合生產的要求，並在報告中注明測試狀態。

6.2  測試人員

6.2.1  測試人同必須穿戴符合環境潔淨度級別的工作服。

6.2.2  靜態測試時，室內測試人員不得多於二人。

6.3  測試時間

6.3.1  對單向流，如100級淨化房間及層流工作台，測試應在淨化空調係統正常運行不少於10min後開始。

6.3.2  對非單向流，如10000級、100000級以上的淨化房間，測試應在淨化空調係統正常運行不少於30min後開始。

6.4  沉降菌計數

6.4.1  采樣點數目及其布置

6.4.1.1  最少采樣點數目

沉降法的最少采樣點數可按表1確定。

6.4.1.2  采樣點的布置

6.4.1.2.1  工作區采樣點的位置離地0.8m~1.5m左右(略高於工作麵)。

6.4.1.2.2  可在關鍵設備或關鍵工作活動範圍處增加采樣點。

6.4.1.2.3  采樣點位置的詳細規則見附圖。

6.5  記錄

測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態。

測試報告的編寫見附表。

6.6  結果

6.6.1  用計數方法得出各個培養皿的菌落數。

6.6.2平均菌落數的計算，見下式。

式中：M為平均菌落數

M1為1號培養皿菌落數

M2為2號培養皿菌落數

Mn為n號培養皿菌落數

n為培養皿總數。

6.7  結果評定

用平均菌落數判斷潔淨區（室）空氣中的微生物。100,000級潔淨區沉降菌(個／m2)應小於等於l0個；10000級潔淨區沉降菌(個／m2)應小於等於3個；100級潔淨區沉降菌(個／m2)應小於等於1個。

6.7.1  潔淨區(室)內的平均菌落數必須低於所選定的評定標準。

6.7.2  若某潔淨區（區）內的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先進行消毒，然後重新采樣兩次，測試結果均須合格。

沉降菌測試記錄